呼吸系统样本的制备

痰液脱落细胞检查是肺癌早期诊断的重要方法之一。痰液脱落细胞的制备的关键在于一是要患者把有病变的细胞咳出来，二是医务人员要把有病变的细胞选出来制成片。二个环节缺一不可。 一、  痰液脱落细胞的制备 (1)痰液采集：通常采用自然咳痰法。指导病人深呼吸后用力咳痰，反复 4-5 次，咳出肺深部的痰液，吐入痰盒内送检。连续 3 天送检，以提高检查的阳性率。 (2)痰液类型及取材： 必须仔细观察痰的性状，认真挑选： 粘液痰：多见于慢性支气管炎的缓解期、支气管哮喘或肺癌病例。痰液透明、无色、粘稠，往往可拉成很长的细丝。如果其中有乳白色的颗粒状物，往往提示有癌细胞的可能，必须选取这部分痰液做涂片检查，以腺癌多见。 粘液脓性痰：是在粘液痰的基础上混有一部分脓液。检查时必须仔细挑选粘液丝的部分做细胞学检查，以腺癌与鳞癌多见。 脓性痰：为黄色或黄绿色的粘痰，因细菌种类的不同，痰的粘稠度和颜色可有不同。常见于气管、支气管和肺化脓性感染。也可见于高分化的鳞癌。 泡沫痰：即痰呈泡沫状，此种痰应在除去泡沫后，采取其中的粘液丝做涂片检查。多见于腺癌和神经内分泌癌。 粉红色浆液泡沫痰：多见于肺淤血，局部毛细血管通透性增加所致，如左心功能不全肺水肿患者。 血丝痰：即痰内带有少量的血液，这是支气管黏膜某个局部小血管破裂出血或肺泡内出血所致。常见于肺癌或支气管结核，有时也见于支气管炎。为了明确出血的原因，应将带血丝的及其附近部分的痰全部制成涂片，进行检查。 铁锈色痰：是因为痰中所含有血红蛋白变性所致，可见于大叶性肺炎、肺梗死等。 棕褐色痰：常见于阿米巴性肺脓疡、慢性充血性心脘病肺淤血时。 灰黑色痰 ：大量吸入煤碳粉法或长期吸烟者可见，选择时尽可能避开这些颗粒。 （3）制片：    用竹签挑取有诊断价值的痰液置于干净的玻璃片上，可采用竹签慢慢铺开的方式，也可采用二张玻璃片对压、左右对拉的方式，直至痰液在二张玻璃片均匀平铺后，立即放入 95%酒精内固定。痰液涂片厚度一般以 1mm 为佳，一般制片 2-4 张，有可疑病例时应根据情况适当多做，以提高阳性率。 二、纤维支气管镜刷片的制作： 随着纤维支气管镜的广泛应用，在直视下于病变部位处直接刷片，不但可以做出病变性质的诊断，而且可以定位。操作方法从刷片将细胞转到玻璃片上，快速铺平，厚度一般以 1mm 为佳，立即放入 95%酒精内固定，防止涂片干燥而影响诊断。也可以将毛刷上的细胞洗于液基固定液内，进行液基薄片处理。 三、  肺泡灌洗液的制作： 应用纤维支气管镜进行支气管肺泡灌洗，灌注一定量的生理盐水，使其细胞成分脱落于液体中，收集灌洗液离心，选择沉淀物涂片，由于沉淀物含有大量粘液，有时不容易涂开，需用竹签把细胞铺平，放入 95%酒精固定（用液基细胞学方法处理效果会更好）。 四、苏木素-伊红染色

1. 涂片固定 30-90 分钟
2. 苏木素染色 2-10 分钟
3. 水洗
4. 1%盐酸酒精分化数秒
5. 水洗，镜下观察，深浅适当后流水蓝化
6. 伊红 2 ～ 5 秒钟
7. 80%酒精脱水数秒
8. 95%酒精 I 脱水 2 分钟
9. 95%酒精 II 脱水 2 分钟
10. 无水酒精 I 脱水 2 分钟
11. 无水酒精 II 脱水 2 分钟
12. 二甲苯 I 透明 2 分钟
13. 二甲苯 II 透明 2 分钟
14. 中性树胶封固。