细胞学染液的配制
**1. 苏木素
(1) Harris 苏木素(退行性染色):
** 配方:
苏木素 1 g 无水乙醇 10 ml
蒸馏水 200 ml 钾明矾 20 g
HgO 0.5 g
先将苏木素溶于无水乙醇中,备用。把硫酸铝钾(起媒染作用。媒染剂:凡能与染料与组织结合,生成色淀,并促进染色的金属离子盐类或金属原子的含氧酸)放入蒸馏水,加热溶解,再加入备用的苏木素,煮沸 2 分钟,先加入少量的氧化汞,防止氧化过程中苏木素外溢,玻棒搅拌,然后,边搅拌边加入氧化汞。加完后,立即移至冰水中,加速其冷却,静置一夜后,过滤。用前以 5% 的比例加入冰醋酸。如配好后时间较长,冰醋酸的量可适当多加一点。冰醋酸的量,可直接影响苏木素的着色能力和清晰度。加少了,会造成核浆共染,背景不干净;加多了,核着色能力下降。此液可放置 3 月至半年左右,视气温而定。使用期要看染色的切片量来定:以每天 100 张片的量,可使用半个月左右。
(2)Gill 改良苏木素液(进行性染色) :
苏木精 2 g 无水酒精 250 ml
硫酸铝 17.6 g 蒸馏水 750 ml
碘酸钠 0.2-0.3 g 冰醋酸 20 ml
先将苏木精溶于无水酒精,硫酸铝溶于蒸馏水,然后两液混合后加入碘酸钠,最后加入冰醋酸。此液为半氧化进行性苏木素液,染色一般不需要分化,不会产生沉淀,氧化膜少。常有人配制此液染不上色或染色较慢,可能与碘酸钠的失效有关,可适当多加一点。
2. 桔黄 G6: 桔黄 G 0.5 克溶于 5 ml 蒸馏水中,加入纯酒精 100 ml,然后加磷钨酸 0.015 克,用时过滤。
- EA36 :是三种染料配合而成。(不可多配,不能久置)
淡绿 SF :2.5 克加入 5 ml 蒸馏水中,加纯酒精 500 ml
俾士麦棕: 0.5 克加入 5 ml 蒸馏水中,加纯酒精 100 ml
醇溶性依红:2.5 克加入 95%酒精 500 ml
配方:
0.5%淡绿液: 45 ml
0.5%俾士麦棕液: 10 ml
0.5%醇溶性依红液: 45 ml
混合后加磷钨酸 0.2 克,再加碳酸锂饱和溶液数滴,个人认为 pH 调至 6.5 左右比较好。
此法的关键在于亮绿( 淡黄),必须购买 Light Green SF Yellowish (如 SIGMA L5382),否则使用相类似的产品往往不容易着色或根本不着色。
EA50(配方一): 3%亮绿水溶液 5 毫升,纯甲醇 125 毫升, 20%伊红 Y 水溶液 10 毫升,冰醋酸 10 毫升,磷钨酸 1 克,95%酒精 350 毫升。混合后加碳酸锂饱和溶液,(用 pH 计测)调 pH 至 6.5 左右。
EA50(配方二,推荐):
0.5%淡绿醇溶液: 225 ml
0.5%俾士麦棕液: 100 ml
0.5%醇溶性依红液: 450 ml
95%酒精 225 ml
磷钨酸 6 克
混合后加碳酸锂饱和溶液,(用 pH 计测)调 pH 至 6.5 左右。