细胞学特殊染色

脂肪染色：　　　　　 苏旦 Ⅲ 法 试剂配制： 苏旦 Ⅲ 0.1-0.2g， 70% 酒精 100 ml 将苏旦 Ⅲ 置于 70%酒精中,加热饱和,在未冷前过滤,静置一夜。 染色步骤：

1. 细胞涂片。
2. 70%酒精固定 1 分钟。
3. 放入苏旦 Ⅲ 酒精溶液中 20-30 分钟。
4. 70%酒精洗去多余的染料。
5. 水洗。
6. 苏木素复染 2-5 分钟。
7. 1%盐酸酒精分化。
8. 水洗，蓝化,甘油封固。 结果：脂肪桔黄或红色。一般用于确定胞浆内空泡究竟是糖原，水变性还是脂滴。

苏丹 Ⅳ（猩红）(Sudan Ⅳ)染色法： 试剂配制： 苏丹 Ⅳ1-2 克加纯酒精 70ml，10%氢氧化钠 20ml，蒸馏水 10ml，制成混合液，略加热，置 37℃ 温箱中 1 小时，取出冷却后过滤，12 小时后即可使用。此液 5 天内失效，建议配制 70%酒精饱和液。 染色步骤：

1. 细胞涂片。
2. 70%酒精固定 1 分钟。
3. 放入苏旦 Ⅳ 酒精溶液中 20-30 分钟。
4. 70%酒精洗去多余的染料。
5. 水洗。
6. 苏木素复染 2-5 分钟。
7. 1%盐酸酒精分化。
8. 水洗，蓝化,甘油封固。 结果：脂肪呈猩红色。

油红染色法： 试剂配制： 油红 O 0.5g，异丙醇 100ml，配成饱和液，长期保存备用。 油红稀释液的配制：取油红饱和液 6 毫升，加蒸馏水 4 毫升，静置 5-10 分钟后过滤后使用。 染色步骤：

1. 细胞涂片。
2. 70%酒精固定 1 分钟。
3. 蒸馏水洗。
4. 油红稀释液染 10-15 分钟，避光、密封。
5. 60%乙醇镜下分化至间质清晰。
6. 水洗。
7. Marry 氏苏木素复染核。
8. 水洗。
9. 甘油或甘油明胶封片。 结果：脂肪呈鲜红色，细胞核呈蓝色，间质无色。

糖原染色 过碘酸-Schiff（PAS）染色法 试剂配制： 碱性品红 1 g ，活性炭 2 g ，当量盐酸 20 ml ，偏重亚硫酸钠 1.5 g Schiff 试剂配制:

1. 碱性品红 1g，放入 200 毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
2. 冷却至 50℃ 时过滤，滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
4. 加活性 2 g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃ 冰箱保存。 染色步骤:
5. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
6. 1%过碘酸水溶液 5-10 分钟。
7. 蒸馏水洗多次。
8. Schiff 液 10-15 分钟。
9. 0.5%偏重亚硫酸钠 （钾）水溶液洗 2 次（1-2 分钟）
10. 流水冲洗 10 分钟。
11. 苏木素复染。（1-2 分钟）
12. 酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 结果：糖原红色。   注意：1. 阴性对照片用淀粉酶消化处理。        2. 糖原容易水解，取材标本最好新鲜，不要经过水洗。        3. 固定液用中性福尔马林为佳。        4. 如 Schiff 液发红, 再加入少量偏重亚硫酸钠,使液体颜色变清后又可使用.

粘液染色 阿尔辛蓝过碘酸雪夫（AB-PAS）染色法 试剂配制： 爱先蓝液： 爱先蓝 8GX 1g ，蒸馏水 97 ml，冰醋酸 3 ml 核固红液: 核固红 0.1g，硫酸铝 5g，蒸馏水   97ml 碱性品红 1 g ，活性炭 2 g ，当量盐酸 20 ml ，偏重亚硫酸钠 1.5 g Schiff 试剂配制:

1. 碱性品红 1g，放入 200ml 蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
2. 冷却至 50℃ 时过滤，滤液中加入当量盐酸 20ml。
3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
4. 加活性 2 g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃ 冰箱保存。 染色步骤:
5. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
6. 蒸馏水洗
7. 3%冰醋酸浸 5 分钟
8. 爱先蓝液染 10 ～ 20 分钟
9. 蒸馏水洗
10. 1%过碘酸水溶液 5-10 分钟。
11. 蒸馏水洗多次。
12. Schiff 液 10-15 分钟。
13. 自来水中浸 10 分钟（经常换水）。
14. 酒精脱水，二甲苯透明，树胶封固。 结果：中性粘液呈红色，酸性粘液物质呈蓝色。中性与酸性粘液的混合物质呈紫红色。

Southgate 胭脂红染色 试剂配制：

1. Southgate 贮备液：胭脂红 1g，无水酒精 50ml，蒸馏水 50ml 升，氢氧化铝 1 g，无水氯化铝 0.5 g 先将无水酒精和蒸馏水 1：1 混合，依次加入试剂，搅拌，水浴中煮沸 3 分钟，冷至室温过滤，并用 50%酒精加至总量 100ml，磨纱瓶冰箱保存。
2. Southgate 稀释液：用前取 10ml 贮存液加蒸馏水 40ml。 染色步骤:
3. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
4. 苏木素染 5 ～ 10 分钟
5. 水洗，1%盐酸酒精分化
6. 水洗，蓝化
7. 蒸馏水洗
8. Southgate 稀释液染 30 分钟
9. 水洗
10. 95%酒精洗二次
11. 无水酒精脱水,透明,封固 结果：酸性粘液呈红色。

淀粉样蛋白 甲基紫法（ Jurgens，1875） 试剂配制：

1. 1%甲基紫水溶液：甲基紫（methyl violet）1g，蒸馏水加至 100ml
2. 1%蜡酸水溶液：冰醋酸 1ml，蒸馏水 99ml 操作方法：
3. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
4. 蒸馏水洗
5. 1%甲基紫水溶液染 3-5 分钟。
6. 水洗，在镜下观察。
7. 1%蜡酸水溶液分化，直至见淀粉样蛋白呈紫红色或红色，胞核呈蓝紫色。
8. 流水稍冲洗。 用阿拉伯树胶封片。或把涂片自然凉干后，用中性树胶封固。 结果：淀粉样蛋白呈紫红色至红色。 注意事项：
9. 如无甲基紫，也可用结晶紫代替，同样可获得异色反应。
10. 染好后的涂片不能用酒精脱水，因为此染料溶于酒精而立即脱色。
11. 染好后的涂片也不宜用甘油明胶封盖。

二、甲醇刚果红法（改良的 Highman）

1. 甲醇刚果红液：刚果红（congo red）0.5g，甲醇 80ml，甘油 20ml
2. 碱性酒精分化液：氢氧化钾 0.2g，80%酒精 100ml 操作方法：
3. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
4. 蒸馏水洗
5. 甲醇刚果红染液染 10 ～ 20 分钟
6. 用碱性乙醇分化液分化数秒
7. 水洗
8. 苏木素复染 2 分钟
9. 水洗数分钟
10. 脱水,透明,封固 结果：淀粉样物呈桔红色。

含铁血黄素   普鲁士蓝反应： 试剂配制：

1. 2%亚铁氢化钾水溶液:   亚铁氢化钾 2 g ，蒸馏水 100 ml
2. 2%盐酸水溶液:   盐酸 2 ml，蒸馏水 98 ml
3. 0.1%沙红(safranine)溶液: 沙红 0.1 g， 蒸馏水 100 ml    染色步骤:
4. 细胞涂片，95%酒精固定 60 分钟以上。
5. 蒸馏水洗
6. 取 2%亚铁氢化钾水溶液和 2%盐酸水溶液等份混合,滴在涂片上，    10 ～ 20 分钟
7. 蒸馏水洗
8. 核复染
9. 水洗,脱水,透明,封固 结果：含铁血黄素呈蓝色。