免疫组化在胸腹水脱落细胞学中的应用
胸腹水脱落细胞学是一个传统而方便的病理学检查，由于缺少组织学结构，常常需要采取辅助的手段，才能作出正确的诊断，特别是免疫组织化学的方法的应用。现将方法介绍如下： 一、制片
- 取液：轻轻的把送检液体上部倒掉，取下层液体，放入离心管。
- 转速 3000/分，2 分钟。
- 看沉淀物的量的多少区别对待：
- 量少：快速倒去液体，将试管竖直倒立于卫生纸上，吸干管口的水分，用吸管吸出沉淀物。如果沉淀物太少，可将液体倒去后再加入送检标本，重复离心，反复多次。倒去上清液，把试管口向上静置几秒，试管壁上的剩余液体会流入管底，用吸管反复抽吸，把管底的细胞全部洗刷到液体里，然后全部吸出，放入 0.5 或 1ml 的尖底离心管内，重新离心，离心完成后，用 200 微升加样枪吸取上清液，最后用加样枪吸出沉淀物，以同心圆顺时针方向，将沉淀涂开，面积越小越好。
- 量多：用吸管吸掉上清液，然后，用吸管吸取沉淀物上层细胞。
- 血多的标本处理：吸取上层沉淀物，放入 25%酒精冰醋酸液内(25%酒精 90ml 加 10ml 冰醋酸），打匀，再离心沉淀。然后，吸取沉淀物。
- 涂片：吸取沉淀物后，滴在玻片上，可采用二张玻片对拉法，也可用吸管涂拉，最好是采用玻片推拉法(玻片与玻片之间角度为 5 度左右。吸取沉淀物涂片的关键：吸取沉淀物内不能带有水分。
- 固定：也是制片的关键。当细胞涂片完成后，应立即放入 95%酒精液体内固定，至于固定液：如甲醇、酒精乙醚液等效果无明显差异。细胞的褪变主要原因不是固定液的种类，而是在制片过程中空气的氧化过程：干燥。固定时间：30 分钟。剩下的送检液体不要立即倒去，等阅片完成后，根据需要再制片做免疫组化或制成组织块后再处理。（可放在冰箱内，也可放在室温状态下 24 小时左右）
二、免疫组化步骤 1、0.5%甲醇双氧水阻断，10-20 分钟
- 双蒸水洗数次
- 用 pH7.6PBS/Triton100 ( 0.05% )浸洗数分钟
- 加一抗室温孵育 60 分钟
- pH7.6PBS /Triton100 (0.05%)液浸洗数分钟
- 加非生物素试剂盒二抗（时间按说明书）
- pH7.6PBS 洗三次
- DAB 显色。
- 水洗，苏木素复染，脱水封片。
三、胸腹水脱落细胞学免疫组化关键
- 去除红细胞。
- 适当的甲醇双氧水浓度和阻断时间。
- 一抗孵育后洗涤要干净。
- 选择低背景、高敏感度的试剂盒： Envison+R PV9000 EliVisionTMplus
- 尽可能用细胞切片做免疫组化。
四、细胞切片的制作: 按常规离心，沉淀。倒去上清液，加入 4%戊二醛，与沉淀物混匀，固定一小时，离心，将上清液倒去，加入 95%酒精一个小时，沉淀物会凝聚成团，脱离管壁，取出后直接放入脱水盒，从 85%酒精开始按常规组织脱水、包埋、切片。
五、抗体的应用：
推断原发部位 肝癌 AFP，Hep 肺癌 TTF-1，SPA 消化道癌 CA19-9 前列腺癌 PSA 绒毛膜上皮癌 HCG 甲状腺癌 TTF-1. TG 卵巢浆液腺肿瘤 CA125
判断类型 神经内分泌癌 CGA Syn 恶性黑色素瘤 S-100 HMB-45 Melanin-A NSE 何杰金氏淋巴瘤 LCA、CD30. ALK 非何杰金氏淋巴瘤 LCA、CD45RO、CD3. CD79a、CD20 鳞癌 CK10、13、14、15、16、17， CK（H） 腺癌 CK7 CK8 CK18 CK19 CK20 CK（L） 间皮 Calreinin MesothelialCell CK5/6
六、结论 胸腹水中细胞成分复杂，细胞类型繁多，加上制片过程中人为的假象，容易导致误诊和漏诊。所以必须要有优质的片子，仔细的观察，合理的应用免疫组化和特殊染色，综合的分析，才能做出正确的诊断。