内分泌腺和胞质颗粒

脑垂体细胞 一、高碘酸-无色品红-橙黄 G 法（ Pearse，1953） 试剂配制： 试剂配制：

1. 0.5%高碘酸水溶液：高碘酸 0.5g，蒸馏水加至 100ml
2. 无色品红液：碱性品红（basic fuchsin）1g，蒸馏水 200ml，1N 盐酸 20ml，偏重亚硫酸钠 1.5g，活性碳 1.5g Schiff 试剂配制:
3. 碱性品红 1g，放入 200 毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
4. 冷却至 50℃ 时过滤，滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
5. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
6. 加活性 2 g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃ 冰箱保存。
7. 0.5%偏重亚硫酸钠溶液：偏重亚硫酸钠 0.5g，蒸馏水加至 100ml
8. 天青石蓝染液：天青石蓝（celestin  blus  B）0.5g，硫酸铁铵 5g，蒸馏水 100ml，纯甘油 14ml，麝香草酚 50mg 用烧杯中盛蒸馏水，加入硫酸铁铵，不断摇动使其完全溶解，再加入天青石蓝，用玻棒搅匀，煮沸 2-3 分钟。在煮沸时应轻轻搅动，防止天青石蓝聚于瓶底成片块状。冷却后过滤并加入纯甘油和麝香草酚。
9. Mayer 氏苏木素：苏木素 0.1g，蒸馏水 100ml，碘酸钠 20mg，硫酸铝铵 5g，柠檬酸 100mg，水合氯醛 5g      苏木素在蒸馏水中使完全溶解（可稍加温），再加入碘酸钠和硫酸铝铵，用玻棒搅动使硫酸铝铵安全溶解，最后加入柠檬酸与水合氯醛，过滤后即可使用。
10. 橙黄 G 液：橙黄 G（orange  G）2g，蒸馏水 100ml，磷钨酸 5g   把橙黄 G 溶于蒸馏水，再加入磷钨酸，稍摇动使其溶解，静置一夜后，吸取上面的澄清液使用。 操作方法：
11. 切片脱蜡至水。
12. 0.5%高碘酸液氧化 5 分钟。
13. 流水冲洗 2 分钟，再用蒸馏水洗一次。
14. 入无色品红液，于室温暗处作用 10-20 分钟。
15. 直接用偏重亚硫酸钠液滴在切片上洗二次，每次约 1 分钟。
16. 流水冲洗 3 分钟。
17. 天青石蓝液染 2-3 分钟。
18. 水洗。
19. Mayer 氏苏木素染 2-5 分钟。
20. 水洗。
21. 1%盐酸酒精稍分化。
22. 流水冲洗至蓝化。
23. 橙黄 G 液复染 10-20 秒。
24. 水洗。
25. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：嗜碱细胞颗粒呈紫红色，嗜酸细胞颗粒橙黄色，嫌色细胞浅灰蓝色或无色，细细胞鲜橙黄色，胞核蓝褐色。

二、三色合染法（ Dawexs 和 Hillier，1964） 试剂配制：

1. 马休黄液：马休黄（Martius  yellow）0.1g，无水酒精 95ml，磷钨酸 2g，蒸馏水 5ml
2. 酸性品红液：酸性品红 1g，蒸馏水 98ml，冰醋酸 2ml
3. 苯胺蓝液：苯胺蓝（aniline blue）0.5g，蒸馏水 99ml，冰醋酸 1ml4. 三色混合液：马休黄液 3 份，酸性品红液 2 份，苯胺蓝液 3 份。 使用前一天依次混合。
4. 天青石蓝液天青石蓝染液：天青石蓝（celestin  blus  B）0.5g，硫酸铁铵 5g，蒸馏水 100ml，纯甘油 14ml，麝香草酚 50mg 用烧杯中盛蒸馏水，加入硫酸铁铵，不断摇动使其完全溶解，再加入天青石蓝，用玻棒搅匀，煮沸 2-3 分钟。在煮沸时应轻轻搅动，防止天青石蓝聚于瓶底成片块状。冷却后过滤并加入纯甘油和麝香草酚。
5. Mayer 氏苏木素液 Mayer 氏苏木素：苏木素 0.1g，蒸馏水 100ml，碘酸钠 20mg，硫酸铝铵 5g，柠檬酸 100mg，水合氯醛 5g          苏木素在蒸馏水中使完全溶解（可稍加温），再加入碘酸钠和硫酸铝铵，用玻棒搅动使硫酸铝铵安全溶解，最后加入柠檬酸与水合氯醛，过滤后即可使用。 操作方法：
6. 切片脱蜡至水。
7. 天青石蓝液染 2-3 分钟。
8. 水洗。
9. Mayer 氏苏木素液染 2-3 分钟。
10. 水洗。
11. 1%盐酸酒精分化。
12. 流水冲洗 10 分钟。
13. 三色混合液染 8-12 分钟。
14. 自来水速洗，滤纸吸干。
15. 无水酒精迅速脱水。
16. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：嗜酸性细胞颗粒呈红色，嗜碱性细胞颗粒蓝色，嫌色细胞浅灰蓝色或无色，红细胞黄色，胞核蓝褐色。

**胰岛细胞 一、硝酸银法（ Grimelius，1968） **试剂配制：

1. 缓冲硝酸银液：1%硝酸银水溶液（新配）3ml，0.2M 醋酸缓冲液（pH5.6）10ml，双蒸水 87ml
2. 还原液：对苯二酚 1g，亚硫酸钠 5g，蒸馏水 100ml 以上两液要临用前配制。
3. 5%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
4. 切片脱蜡至水，用蒸馏水再洗二次。
5. 切片放入预热的缓冲硝酸银液（60℃）3 小时。
6. 用滤纸稍吸去周围银液，蒸馏水速洗。
7. 入还原液（45℃）处理 1 分钟。
8. 蒸馏水洗，显微镜下观察。
9. 5%硫代硫酸钠液处理 1 分钟。
10. 流水冲洗 10 分钟。
11. 95%酒精及无水酒精脱水。
12. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：胰岛 α 细胞胞质内颗粒呈棕黑色，β 和 δ 细胞阴性。

二、、醛品红橙黄 G 法（改良 Gomori，1950） 试剂配制：

4. 酸化高锰酸钾水溶液： 甲液：0.5%高锰酸钾水溶液高锰酸钾 0.5g，蒸馏水加至 100ml 乙液：0.5%硫酸水溶液：纯硫酸 0.5ml，蒸馏水 99.5ml 甲、乙两液分瓶装，临用前等份混合。
5. 2%草酸水溶液：草酸 2g，蒸馏水加至 100ml
6. 醛品红染液：碱性品红 0.5g，70%酒精 95ml，浓盐酸 1ml，三聚乙醛 1ml      将碱性品红溶解于 70%酒精，然后加浓盐酸和三聚乙醛 1ml，慢慢摇动使之均匀混合，24 小时后可以使用。 操作方法：
7. 新鲜组织固定于 Bouin 氏液，流水冲洗一晚，然后按常规脱水包埋。
8. 常规脱蜡至水。
9. 酸化高锰酸钾液氧化 5 分钟。
10. 水洗。
11. 2%草酸液漂白 2-3 分钟。
12. 流水冲洗 5 分钟。
13. 70%酒精稍洗。
14. 醛品红液染 15-30 分钟。
15. 70%酒精稍洗，至无多余颜色脱下。
16. 水洗。
17. 橙黄 G 液复染约 1 秒钟。
18. 水洗后常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：β 细胞胞质内颗粒呈紫红至深紫色，背景为淡黄色。

肾上腺嗜铬细胞   甲苯胺蓝法（Wiesel） 试剂配制：

1. Regaud 氏固定液：3%重铬酸钾 80ml，浓甲醛液 20ml 临用前把两液混合，混合 24 小时后开始失效。
2. 1%甲苯胺蓝液：甲苯胺蓝 1g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
3. 新鲜组织立即置入 Regaud 氏液固定 2-3 天，每天换一次新液，再用 3%重铬酸钾水溶液固定一天。
4. 流水冲洗 24 小时，然后按常规脱水包埋。
5. 切片脱蜡至水，再用蒸馏水洗。
6. 用 1%甲苯胺蓝液染 20 分钟。
7. 水洗。
8. 用 95%酒精急速分化（约 1-2 秒钟）。
9. 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：嗜铬细胞质呈绿黄色，胞核蓝色。

类癌 一、嗜银反应（Grimelius，1968） 试剂配制：

1. 缓冲硝酸银液：1%硝酸银水溶液 3ml，0.2M 醋酸缓冲液（pH5.6）10ml，蒸馏水 87ml
2. 还原液：对苯二酚 1g，亚硫酸钠 5g，蒸馏水 100ml 以上两液均需临用前配制
3. 5%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
4. 切片脱蜡至水，蒸馏水洗。
5. 放入预热的缓冲硝酸银液（60℃）3 小时。
6. 用滤纸稍吸去周围银液，蒸馏水速洗。
7. 入还原液内（45℃）处理 1 分钟。
8. 蒸馏水洗，显微镜下观察。
9. 5%硫代硫酸钠液处理 1 分钟。
10. 流水冲洗 10 分钟。
11. 95%酒精及无水酒精脱水。
12. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：嗜银颗粒呈棕黑色。 注意事项：
13. 组织必须新鲜。
14. 适合甲醛或含甲醛的固定组织，不能用含酒精的固定液，因酒精可溶解嗜银颗粒。

二、亲银反应（Masson-Fontana，1928） 试剂配制：

1. 银氨液：取 10%硝酸银水溶液 20ml，逐滴加入氢氧化铵至产生沉淀后，继续滴加氢氧化铵使生成的沉淀溶解，溶液变清，再滴

入 10%硝酸银数滴至溶液轻微混浊，然后加入蒸馏水 20 ml，过滤后使用。

2. 1%氯化金水溶液：氯化金 1g，蒸馏水加至 100ml 先配制成 1%氯化金液，用棕色小口砂塞瓶储存，再取 1%氯化金液 1 份加蒸馏水 4 份配成 0.2%氯化金液使用。
3. 5%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml
4. 核固红液: 核固红 0.1g，硫酸铝 5g，蒸馏水   97ml 操作方法：
5. 切片脱蜡至水，蒸馏水洗。
6. 把切片放入银氨液内于暗处室温下作用 24-48 小时。
7. 蒸馏水洗。
8. 0.2%氯化金水溶液调色 1 分钟。
9. 蒸馏水洗。
10. 5%硫代硫酸钠液处理 1-2 分钟。
11. 流水冲洗 5 分钟。
12. 核固红液复染胞核 5-10 分钟。
13. 自来水速洗。
14. 95%酒精、无水酒精脱水、二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：亲银颗粒呈黑棕色，黑色素也呈黑色，胞核红色。 注意事项：
15. 组织必须新鲜并及时固定。
16. 必须用甲醛或含甲醛的固定液固定标本。

肥大细胞 一、甲苯胺蓝法 试剂配制：

1. 0.5%甲苯胺蓝液：甲苯胺蓝 0.5g，蒸馏水加至 100ml
2. 0.5%冰醋酸液：冰醋酸 0.5ml，蒸馏水 99.5ml 操作方法：
3. 用 10%甲醛生理盐水溶液固定，按常规脱水包埋。切片脱蜡至水。
4. 0.5%甲苯胺蓝液染 20-30 分钟。
5. 水洗。
6. 0.5%冰醋酸液分化，直到胞核和颗粒清晰（在显微镜下控制）。
7. 水洗，用风扇吹干或温箱烘干。
8. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：肥大细胞颗粒呈红紫色，胞核蓝色。

**二、醛品红-橙黄 G 法（改良的 Gomori，1950） **试剂配制：

1. 醛品红染液：碱性品红 0.5g，70%酒精 95ml，浓盐酸 1ml，三聚乙醛 1ml      将碱性品红溶解于 70%酒精，然后加浓盐酸和三聚乙醛 1ml，慢慢摇动   使之均匀混合，24 小时后可以使用。
2. 橙黄 G 液：橙黄 G（orange  G）2g，蒸馏水 100ml，磷钨酸 5g   把橙黄 G 溶于蒸馏水，再加入磷钨酸，稍摇动使其溶解，静置一夜后，吸取上面的澄清液使用。 操作方法：
3. 用 10%甲醛生理盐水溶液固定，按常规脱水包埋。
4. 切片脱蜡至酒精。
5. 70%酒精稍洗。
6. 入醛品红液染 10-15 分钟。
7. 70%酒精分化并洗去多余染液。
8. 水洗。
9. 橙黄 G 液滴染约 1 秒钟。
10. 水洗。
11. 各级酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：肥大细胞颗粒呈紫红至深紫色，弹力纤维也呈深紫色，红细胞鲜橙黄色，其余组织为淡黄色。