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病理性沉着物

纤维素    一、马休黄-酸性品红-苯胺蓝法（改良 Lendrum,1962） 试剂配制： （1）青石蓝染液：酸铁铵 5g，馏水 100ml，青石蓝（celestine blue B）0.5g，甘油 14ml，香草酚）50mg 用三角烧瓶盛蒸馏水，加入硫酸铁铵，不断摇动使其完全溶解。再加入天青石蓝，煮沸 2-3 分钟，在煮沸时用玻璃棒轻轻不断搅动。冷却后过滤，最后加入纯甘油和麝香草酚 （2）Mayer 氏苏木素：苏木素 0.1g，蒸馏水 100ml，碘酸钠 20mg，硫酸铝铵 5g，柠檬酸 0.1g，水合氯醛 5g 苏木素在蒸馏水中完全溶解（必要时间稍加温），再加碘酸钠及硫酸铝铵，不断和玻璃棒搅动使硫酸铝铵完全溶解，最后加入柠檬酸与水合氯醛，过滤后即可使用。 （3）  马休黄染液：马休黄（Martius yellow）0.5g，95%酒精 100ml，磷钨酸 2g 先把马休黄溶于 95%酒精，再加入磷钨酸。 （4）酸性品红液：酸性品红（acid fuchsin）1g，蒸馏水 98ml，冰醋酸 2ml（5）苯胺蓝染液：苯胺蓝（aniline blue）0.5g，蒸馏水 99ml，冰醋酸 1ml（6）1%磷钨酸水溶液：磷钨酸 1g，蒸馏水 100ml （7）1%醋酸水溶液：冰醋酸 1ml，蒸馏水 99ml 操作方式：

  1. 组织固定于甲醛氯化汞液，流水冲洗一晚，常规脱水包埋。
  2. 切片脱蜡至水，并进行除汞处理： （1）切片于 0.5%碘酒精液作用 10 分钟。 （2）水洗。 （3）5%硫代硫酸钠脱碘 5 分钟。 （4）流水冲洗 10 分钟。
  3. 天青石蓝液染 2-3 分钟。
  4. 水洗。
  5. Mayer 氏苏木素染 2-3 分钟。
  6. 水洗。
  7. 1%盐酸酒精分化。
  8. 流水冲洗 10 分钟。
  9. 95%酒精稍洗。
  10. 马休黄液染 2 分钟。
  11. 蒸馏水稍洗。
  12. 酸性品红液染 10 分钟。
  13. 蒸馏水稍洗。
  14. 1%磷钨酸水溶液处理 5 分钟。
  15. 蒸馏水稍洗。
  16. 苯胺蓝液染 5-10 分钟。
  17. 1%醋酸水溶液洗去多余染液并分化。
  18. 不水洗，直接用滤纸吸去周围水份。
  19. 95%酒精急速脱水，再经无水酒精。
  20. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：纤维素鲜红色，肌纤维红色，胞核蓝褐色，胶原纤维蓝色，红细胞黄色，陈旧的纤维素紫蓝色。

二、苯酚结晶紫法（Weigert 法） 试剂配制： （1）碳酸锂胭脂红液：胭脂红（carmine）2g，碳酸锂饱和水溶液（约 1.2%）100ml，麝香草酚 100mg 把胭脂红溶于碳酸锂饱和水溶液，慢火煮沸 10 分钟，冷却后加入麝香草酚，用前过滤。 （2）5%苯酚水溶液：苯酚 5ml，蒸馏水 95ml（可稍加温使其溶解） （3）结晶紫酒精液：结晶紫（crystal violet）5g，无水酒精 100ml，配后用小口砂塞瓶密封存放。 （4）苯酚结晶紫染液：结晶紫酒精液 1 份，5%苯酚水溶液 9 份 （5）Weigert 氏碘液：碘片（iodine）1g，碘化钾 2g，蒸馏水 100ml （6）苯胺二甲苯液：1 份苯胺（aniline），二甲苯 3 份 操作方法：

  1. 切片脱蜡至水。
  2. 碳酸锂胭脂红液滴染 5-10 分钟。
  3. 直接滴入 1%盐酸酒精半分钟。
  4. 流水冲洗 5 分钟。
  5. 用苯酚结晶紫液滴染 5 分钟。
  6. 倾去染液，用滤纸稍吸干切片周围染液。
  7. Weigert 氏碘处理 1-2 分钟。
  8. 水洗后用虎纸彻底吸干水份。
  9. 苯胺二甲苯分化，并摇动切片使分化均匀。必要时要更换新的分化液，至无颜色脱出，立即倾去苯胺二甲来。
  10. 滴入新的二甲苯，以除去苯胺，然后在镜下观察。如分化不足，可再滴上苯胺二甲继续分化，至切片清晰为止。
  11. 用二甲苯反复滴洗数次，彻底把苯胺除去。
  12. 中性树胶封固。 结果：纤维素呈蓝紫色，胞核红色。革兰氏阳性细菌也呈蓝紫色。

**淀粉样蛋白 **一、甲基紫法（ Jurgens，1875） 试剂配制： （1）1%甲基紫水溶液：甲基紫（methyl violet）1g，蒸馏水加至 100ml （2）1%蜡酸水溶液：冰醋酸 1ml，蒸馏水 99ml 操作方法：

  1. 组织固定于 10%甲醛液，按常规脱水包埋。（用冰冻切片效果更佳）。
  2. 常规脱蜡至水。
  3. 1%甲基紫水溶液染 3-5 分钟。
  4. 水洗，在镜下观察。
  5. 1%蜡酸水溶液分化，直至见淀粉样蛋白呈紫红色或红色，胞核呈蓝紫色。6. 流水稍冲洗。 用阿拉伯树胶封片。或把切片自然凉干后，用中性树胶封固。 结果：淀粉样蛋白呈紫红色至红色，胞核、胞质、结缔组织呈蓝色至深浅不同的紫色。 注意事项：1. 如无甲基紫，也可用结晶紫代替，同样可获得异色反应。
  6. 切片不能用酒精脱水，因为此染料溶于酒精而立即脱色。
  7. 切片也不宜用甘油明胶封盖。

二、甲醇刚果红法（改良的 Highman） （1）甲醇刚果红液：刚果红（congo red）0.5g，甲醇 80ml，甘油 20ml （2）碱性酒精分化液：氢氧化钾 0.2g，80%酒精 100ml 操作方法：

  1. 切片脱蜡至水

  2. 甲醇刚果红染液染 10 ～ 20 分钟

  3. 用碱性乙醇分化液分化数秒

  4. 水洗

  5. 苏木素复染 2 分钟

  6. 水洗

  7. 脱水,透明,封固 结果：淀粉样物呈桔红色。

    尿素结晶黄醇冰醋酸法（Oliver，1921） 试剂配制： 黄醇冰醋酸液：黄醇（xanthydrol）6g，无水酒精 35ml，冰醋酸 65ml 此液于临用前配制，先把黄醇溶于无水酒精和冰醋酸，待彻底溶解后即可用。操作方法：

  8. 尸解时切取不厚于 2-3mm 的脑组织小块，放入上述黄醇冰醋酸液内固定 6 小时。

  9. 转入无水酒精补充固定和脱水 2 次，每次 12-24 小时。

  10. 再置入常规的无水酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋，切片厚 3-4μm。4. 切片常规脱蜡至水。

  11. 明矾苏木素染核 5 分钟。

  12. 水洗。

  13. 1%盐酸酒精稍分化。

  14. 流水冲洗 15 分钟。

  15. 0.25%曙红液复染。

  16. 水洗。

  17. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：尿素结晶呈棕黄色的放射状梅花形结晶，胞核蓝色，其他组织红色。注意事项：

  18. 黄醇冰醋酸液应于临用前配制，所取的组织块不可过厚。

  19. 尿素结晶极易溶解于水，不能用一般的水溶液固定剂固定，组织取好后必须立即放入黄醇冰醋酸液内固定。

    含铁血黄素   普鲁士蓝反应： 试剂配制：

  20. 2%亚铁氢化钾水溶液:   亚铁氢化钾 2 g ，蒸馏水 100 ml

  21. 2%盐酸水溶液:   盐酸 2 ml，蒸馏水 98 ml

  22. 0.1%沙红(safranine)溶液: 沙红 0.1 g， 蒸馏水 100 ml    染色步骤:

  23. 切片脱蜡至蒸馏水

  24. 取 2%亚铁氢化钾水溶液和 2%盐酸水溶液等份混合,滴在切片上，    10 ～ 20 分钟

  25. 蒸馏水洗

  26. 核复染

  27. 水洗,脱水,透明,封固 结果：含铁血黄素呈蓝色。 应用：     明确含铁血黄素的存在。如长期的肺郁血、出血；陈旧性出 血灶；肝硬化时慢性脾郁血的含铁结节；硬化性血管瘤；动 脉瘤性骨囊肿；绒毛色素性滑膜炎等。

**胆色素 **三氯醋酸三氯化铁法（Hall）法： 试剂配制：     Fouchet 液：三氯醋酸 25 克溶于蒸馏水 100 毫升内，再将三氯化铁 1 克溶于 10 毫升蒸馏水内并加入到三氯醋酸里，混合，棕色瓶贮存。    染色步骤:

  1. 切片脱蜡至蒸馏水
  2. 入 Fouchet 液中染 30 ～ 60 分钟
  3. 蒸馏水洗 2 分钟
  4. 在 Van Gieson 液中复染 1 ～ 2 秒钟（淡染）
  5. 水洗，60℃ 温箱中烘干，二甲苯透明，树胶封固。 结果：胆红素呈绿色，其他如复染呈红色和黄色。 应用： 胆色素主要的化学成份是胆红素和橙色血质。胆红素为黄褐色颗粒或同质性团块，它在肝细胞内形成。当胆道梗阻或胆红素代谢障碍时，胆红素被肝的星形细胞吞噬，如肝细胞发生变性，也常有胆色素沉着于其胞质内，毛细血管和小胆管腔内则形成胆汁“栓子”。阻塞性黄疸时，肾曲管上皮细胞有胆色素，并可在肾小管腔内形成胆汁管型，然而在溶血性黄疸则否。

**黑色素 **（1） 漂白法：

  1. 切片脱蜡至蒸馏水
  2. 入 0.25%的高锰酸钾 2-4 小时
  3. 蒸馏水洗
  4. 入 1%草酸处理 1-2 分钟
  5. 水洗,核复染,脱水,透明,封固 结果:经处理后的切片如色素被脱色,说明是黑色素。

（2）LiLLie 亚铁反应法： 试剂配制：   硫酸亚铁溶液：硫酸亚铁（FeSO4•7H2O）2.5 克溶于 100ml 蒸馏水中   醋酸铁氰化钾溶液：铁氰化钾 1 克溶于 1%醋酸溶液 100ml 中。    染色步骤:

  1. 切片脱蜡至蒸馏水
  2. 入硫酸亚铁溶液 60 分钟
  3. 蒸馏水洗多次
  4. 入醋酸铁氰化钾溶液中处理 30 分钟
  5. 1%醋酸水溶液中分化数秒
  6. 水洗,可复染(Van Gieson 或核固红)
  7. 水洗, 60℃ 温箱中烘干，二甲苯透明，树胶封固。 结果:黑色素呈绿色。 注意：1. 醋酸铁氰化钾溶液和硫酸亚铁溶液需现配现用,不 能保存。
  8. 含铁血黄素有时也可呈绿色反应,所以,必要时应作铁染色。

**脂褐素 **高碘酸-无色品红法（ McManus，1948） 试剂配制： （1）0.5%高碘酸水溶液：高碘酸 0.5g，蒸馏水加至 100ml （2）无色品红液：碱性品红（basic fuchsin）1g，蒸馏水 200ml，1N 盐酸 20ml，偏重亚硫酸钠 1.5g，活性碳 1.5g Schiff 试剂配制:

  1. 碱性品红 1g，放入 200 毫升蒸馏水中，煮沸，搅拌，充分溶解。
  2. 冷却至 50℃ 时过滤，滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
  3. 加偏重亚硫酸钠 1.5 g，置于暗处过夜。
  4. 加活性 2 g，摇晃，过滤，以无色为最佳。棕色瓶，4℃ 冰箱保存。 （3）0.5%偏重亚硫酸钠溶液：偏重亚硫酸钠 0.5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
  5. 切片脱蜡至水。
  6. 0.5%高碘酸水溶液氧化 5-8 分钟。
  7. 流水冲洗 2 分钟，再用蒸馏水洗一次。
  8. 入无色品红液，于室温下置暗处使用 10-20 分钟。
  9. 直接用 0.5%偏重亚硫酸钠溶液滴洗 2 次，每次约 1 分钟。
  10. 流水冲洗 5 分钟。
  11. 苏木素浅染胞核 3-5 分钟。
  12. 水洗。
  13. 1%盐酸酒精分化 1-2 秒钟。
  14. 流水冲洗 10 分钟。
  15. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：脂褐素呈大小一致的红色颗粒，胞核蓝色。 注意事项： 苏木素染胞核不可过深，否则会遮盖脂褐素的红色。

**钙盐 **一、硝酸银法（ Von  Kossa，1901） 试剂配制： （1）1%硝酸银液：硝酸银 1g 蒸馏水加至 100ml （2）2%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 2g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：

  1. 切片脱蜡至水。
  2. 蒸馏水洗。
  3. 切片入 1%硝酸银液置于强阳光处作用 15-60 分钟。
  4. 蒸馏水洗 3 分钟。
  5. 2%硫代硫酸钠液处理 2 分钟。
  6. 流水冲洗 5 分钟。
  7. 苏木素液染 4-6 分钟。
  8. 水洗。
  9. 1%盐酸酒精分化。
  10. 流水冲洗 10-15 分钟。
  11. 曙红液染 2-3 分钟，水洗。
  12. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：钙盐呈褐黑至深黑色。 注意事项：
  13. 钙盐的固定应使用中性缓冲甲醛液，不能使用酸性固定剂，因酸可溶解部分的钙盐。也不要采用 10%甲醛钙固定液。
  14. 硝酸银液的浓度由 0.5-5%均可，采用 1%的浓度，主要取决于暴光的亮度和时间，若暴露于强阳光下，需时 15 分钟已足，若暴露于紫外光灯下 5-10 分钟即可。

二、茜素红 S 法（ McGee-Russell，1958） 试剂配制： 茜素红 S（alizarin red S）2g，蒸馏水 100ml 等茜素红 S 溶解于蒸馏水后，用 10%氢氧化铵调整其 pH 至 4.2（每 100ml 茜素红 S 液，约加 10 滴%氢氧化铵）。 操作方法：

  1. 组织固定于 10%缓冲中性甲醛液，按常规脱水包埋。
  2. 切片脱蜡至水。
  3. 茜素红 S 液滴染 3-5 分钟。
  4. 用滤纸吸干周围染液。
  5. 入丙仁酮洗数秒钟。
  6. 丙酮二甲苯（1:1）洗数秒钟。
  7. 二甲苯透明二次，中性树胶封固。 结果：钙盐沉淀处呈橘红色。 注意事项：
  8. 显微镜下控制，如染色时间过长，可出现扩散现象。
  9. 此方法适用于含量较少的钙盐，因其显示橘红色而易于观察。

铜染色

罗丹明染色法

试剂配制：

（1）DMAB-罗丹明贮备液：对二甲氨基苄罗丹明饱和于无水乙醇中，贮存液 4℃ 保存。

（2）DMAB-罗丹工作液（充分摇动）：DMAB-罗丹明贮备液 3ml，蒸馏水 47ml，

使用前现配现用。

染色步骤：

（1）切片脱蜡至蒸馏水。

（2）用 DMAB-罗丹明液 60℃ 染色 3 小时（1 小时后显微镜下检查）。

（3）蒸馏水冲洗。

（4）对比染色（颜色要浅些）用苏木精染 5 秒。

（5）盐酸乙醇分化。

（6）流水冲洗 5 分钟。

（7）脱水，透明，封固。

**结果：**铜沉积物-砖红色，核-蓝色，胆汁-绿色。

注意事项：

（1）染色时加已知的阳性对照片和切片一起进行染色，确保获得正确的结果。

（2）（步骤 2）切片在 60℃ 染色偶而出现一些染色背景。

（3）Depex 封固剂中的二甲苯会过滤罗丹明的颜色，铜染色的颜色会显的模糊。

（4）封固观察切片之前不能长时间停留在二甲苯中，二甲苯会降低罗丹明颜色的强度。

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