酶类
碱性磷酸酶 钙钴法（改良的 Gomori 法，1952） 试剂配制：
- 碱性磷酸酶孵育液：2%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerophos-phate）2.5ml ，2%巴比妥钠 2.5ml ，2%氯化钙 4.5ml，2%硫酸镁 0.2ml 蒸馏水 0.3ml 依次混合后，pH 值应为 9.2-9.4。
- 2%硝酸钴水溶液：硝酸钴（codalt nitrate）2g，蒸馏水加至 100ml
- 1%硫化铵水溶液：硫化铵 1ml，蒸馏水 99ml 操作方法： A、冰冻切片法：
- 新鲜组织低温恒冷切片厚 4-6μm，贴于玻片，风扇吹干后有冷丙酮固定 10 分钟。或组织用 105 甲醛钙于 4℃ 冰箱固定 12-18 小时，冰冻切片，蒸馏水洗后贴于玻片上，风扇吹干。
- 入碱性磷酸酶孵育液（预热 37℃）于 37℃ 怛温箱孵育。
- 蒸馏水洗 2-3 次，每次 1 分钟。
- 2%硝酸钴水溶液作用 5 分钟。
- 蒸馏水洗 2-3 次，每次 1 分钟。
- 15 硫化铵水溶液处理 1 分钟。
- 流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
- 阿拉伯糖胶封盖或常规脱水透明，中性树胶封固。 B、石蜡切片法：
- 新鲜组织取材 2mm 厚，用冷丙酮于 4℃ 冰箱固定 12-18 小时。更换冷丙酮 2 次，每次约 30-60 分钟。
- 二甲苯透明 2 次（室温）。每次约 30 分钟。
- 浸蜡 2-3 次，每次约 20-30 分钟。（温度不要高于 60℃）。
- 石蜡包埋。如不立即切片，蜡块放于 4℃ 冰箱保存。
- 石蜡切片厚 4-6μm，在 37℃ 温水贴片。
- 在 45℃ 温箱烧片 1-2 小时。
- 切片常规脱蜡至水。
- 入孵育液（预热至 37℃）于 37℃ 恒温箱孵育半至 3 小时或更长时间。
- 蒸馏水洗 2-3 次，每次 1 分钟。
- 2%硝酸钴水溶液作用 5 分钟。
- 蒸馏水洗 2-3 次，每次 1 分钟。
- 1%硫化铵水溶液处理 1 分钟。
- 流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
- 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：碱性磷酸酶活性处呈棕黑色沉淀。 对照方法：
- 另配一孵育液，其中省去 β-甘油磷酸钠，改用等量的蒸馏水代替。
- 把切片先置入 80-90℃ 的热水中处理 10 分钟，然后按上述孵育方法进行操作。
- 切片用 Lugol 氏碘液处理 3 分钟，5%硫代硫酸钠液处理 1 分钟，充分水洗后入孵育液。 经上述方法之一处理过的对照片应为阴性。
酸性磷酸酶 硝酸铅法（根据 Gomori 法） 试剂配制：
酸性磷酸酶孵育液：巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0）10ml，硝酸铅（lead nitrare）12mg，3%β-甘油磷酸钠（sodiumβ-glycerop-hosp hate）1ml，先把硝酸铅溶于巴比妥醋酸缓冲液（pH5.0），然后加入 β-甘油磷酸钠，混合后过滤，调 pH 值至 pH5.0 操作方法：
新鲜组织低温恒冷片厚 6μm，冷丙酮固定 10 分钟。
把切片置入酸性磷酸酶孵育液（预热至 37℃），37℃ 孵育 0.5- 2 小时。
蒸馏水洗 3 次，每次 1 分钟。
1%冰醋酸液略洗。
蒸馏水浸洗 2 次。
1%硫化铵液处理 1 分钟。
流水冲洗数分钟，再用蒸馏水洗。
常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：酸性磷酸酶活性处呈棕黄至棕褐色。
**三磷酸腺苷酶钙激活法 1973. ** 试剂配制：
碱性前孵育液（pH10.0）： 0.1M 巴比妥钠 2ml，0.18M 氯化钙 2ml，蒸馏 6ml
酸性前孵育液：0.2M 醋酸盐缓冲液（pH4.6）10ml
底物孵育液（pH9.4）：0.1M 巴比妥钠 2ml，0.18M 氯化钙 1ml，蒸馏水 7ml，三磷酸腺苷二钠盐（adenosine-5′-triphosphate，disodium）25mg，调 pH 至 9.4。 操作方法：
新鲜组织低温恒冷切片厚 6μm，分别贴于 2 张玻片上，风扇吹干。
取一张切片，于碱性前孵育液（pH10.0）室温孵育 15 分钟。
取另一张切片，入酸性前孵育液（pH4.6）室温孵育 5 分钟，然后再入碱性前孵育液（pH10.0）洗 30 秒钟。
将上述二张切睛入底物孵育液（pH9.4）于室温孵育 30-45 分钟。
1%氯化钙液浸洗 3 次，每次约 3 分钟。
2%氯化钴液处理 3 分钟。
于 0.01M 巴比妥钠液充分洗 4-5 次。
流水冲洗 1 分钟，蒸馏水洗。
1%硫化铵液处理 1 分钟。
充分水洗。
常规脱水透明，中性树胶封固。
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