粘液染色
过碘酸-Schiff(PAS)染色法
试剂配制:
碱性品红 1 g ,活性炭 2 g ,当量盐酸 20 ml ,偏重亚硫酸钠 1.5 g
Schiff 试剂配制:
- 碱性品红 1g,放入 200 毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
- 冷却至 50℃ 时过滤,滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
- 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
- 加活性炭 2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃ 冰箱保存。
所谓 Schiff’s 试剂冷配法,就是将热配法的配方,依次加入容器,用震荡器震荡 2 小时,然后加活性炭 1 克,震荡 10 分钟,过滤便可使用。
染色步骤:
- 切片脱蜡至蒸馏水。
- 1%过碘酸水溶液 5-10 分钟。
- 蒸馏水洗多次。
- Schiff 液 10-15 分钟。
- 0.5%偏重亚硫酸钠 (钾)水溶液洗 2 次(1-2 分钟)
- 流水冲洗 10 分钟。
- 苏木素复染。(1-2 分钟)
- 酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
结果:中性粘液呈红色。
阿尔辛蓝(AB)染色法(pH2.5)
试剂配制:爱先蓝液: 爱先蓝 8GX 1g ,蒸馏水 97 ml,冰醋酸 3 ml
核固红液: 核固红 0.1g,硫酸铝 5g,蒸馏水 97ml
染色步骤:
- 切片脱蜡至蒸馏水。
- 爱先蓝液染 10 ~ 20 分钟
- 蒸馏水洗
- 核复染(核固红 5 分钟),水洗
- 脱水,透明,封固。
结果:唾液酸及弱硫酸化粘液及一般粘液呈蓝色。常用于确定胞浆内空泡的性质,特别是当细胞呈现印戒样特征时。
阿尔辛蓝过碘酸雪夫(AB-PAS)染色法
试剂配制:
爱先蓝液: 爱先蓝 8GX 1g ,蒸馏水 97 ml,冰醋酸 3 ml
核固红液: 核固红 0.1g,硫酸铝 5g,蒸馏水 97ml
碱性品红 1 g ,活性炭 2 g ,当量盐酸 20 ml ,偏重亚硫酸钠 1.5 g
Schiff 试剂配制:
- 碱性品红 1g,放入 200ml 蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
- 冷却至 50℃ 时过滤,滤液中加入当量盐酸 20ml。
- 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
- 加活性 2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃ 冰箱保存。
染色步骤: - 切片脱蜡至蒸馏水。
- 爱先蓝液染 10 ~ 20 分钟
- 蒸馏水洗
- 1%过碘酸水溶液 5-10 分钟。
- 蒸馏水洗多次。
- Schiff 液 10-15 分钟。
- 流水冲洗 10 分钟。
- 酒精脱水,二甲苯透明,树胶封固。
结果:中性粘液呈红色,酸性粘液物质呈蓝色。中性与酸性粘液的混合物质呈紫红色。
Southgate 胭脂红染色
试剂配制:
- Southgate 贮备液:胭脂红 1g,无水酒精 50ml,蒸馏水 50ml 升,氢氧化铝 1 g,无水氯化铝 0.5 g
先将无水酒精和蒸馏水 1:1 混合,依次加入试剂,搅拌,水浴中煮沸 3 分钟,冷至室温过滤,并用 50%酒精加至总量 100ml,磨纱瓶冰箱保存。 - Southgate 稀释液:用前取 10ml 贮存液加蒸馏水 40ml。
- 马休黄液:将马休黄 0.5 g 溶于 100ml95%酒精中,再加入磷钨酸 2 g。
染色步骤: - 切片脱蜡至水
- 苏木素染 5 ~ 10 分钟
- 水洗,1%盐酸酒精分化
- 水洗,蓝化
- Southgate 稀释液染 30 分钟
- 水洗
- 95%酒精洗二次
- 马休黄液复染 15 ~ 20 分钟(这一步可不染)
- 水稍洗
- 脱水,透明,封固
结果:酸性粘液及新型隐球菌荚膜呈红色,其他组织黄色。
粘蛋白染色的应用: - 鉴定粘液性肿瘤、印戒细胞的性质。
- 观察慢性气管炎粘液腺的活动状态。
- 观察基底膜结构及完整性。
- 鉴别肠上皮化生的类型。