核酸
一、酸水解-无色品红法(Feulgen and Rossenbeck,1924) 试剂配制:
- 0.2%亮绿水溶液:亮绿(light green)0.2g,蒸馏水加至 100ml
- 无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水 200ml,1N 盐酸 20ml,偏重亚硫酸钠 1.5g,活性碳 1.5g Schiff 试剂配制:
- 碱性品红 1g,放入 200 毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
- 冷却至 50℃ 时过滤,滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
- 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
- 加活性炭 2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃ 冰箱保存。
- 0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠 0.5g,蒸馏水加至 100ml
- 1N 盐酸水溶液:浓盐酸(比重 1.19)8.4ml,蒸馏水加至 100ml 操作方法:
- 切片经二甲苯脱蜡至水。
- 室温中的 1N 盐酸稍洗。
- 放入预热至 60℃ 的 1N 盐酸水解 6-8 分钟。
- 室温中的 1N 盐酸稍洗。
- 蒸馏水洗。
- 入无色品红液,于室温下置暗处作用 30-60 分钟。
- 不经水洗,直接滴入 0.5%偏重亚硫酸钠水溶液洗二次,每次约 1 分钟。
- 流水洗 5-10 分钟。
- 0.2%亮绿水溶液复染数秒钟。
- 水洗。
- 常规脱水透明,中性树胶封固。 结果:脱氧核糖核酸呈紫红色,胞质和其他组织成份绿色。
(二)、甲基绿派洛宁法(Cook,1974) 试剂配制:
- 2%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g,蒸馏水加至 50ml 用三氯甲烷抽提:取 2%甲基绿水溶液 20ml,倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷 20ml,充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞,慢慢地把有着色的三氯甲烷流去。如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液。
- 5%派洛宁水溶液:派洛宁 G(pyronine G)1g,蒸馏水加至 20ml
- 0.2M 醋酸盐缓冲液(pH 4.8):0.2M 醋酸液 41ml,0.2M 醋酸钠液 59ml
- 甲基绿派洛宁染液:2%甲基绿水溶液(经抽提)5ml,5%派洛宁水溶液 1ml,蒸馏水 12ml,0.2M 醋酸盐缓冲液(pH 4.8)18ml 操作方法:
- 新鲜组织固定于 Carnoy 氏液(4℃)3-6 小时,经 95%酒精和无水酒精脱水,二甲苯透明,石蜡包埋。
- 切片经二甲苯脱蜡至蒸馏水
- 置入甲基绿派洛宁染液于室温染 30-60 分钟。
- 取出切片,不经水洗,用滤纸吸干多余染液。
- 用丙酮迅速分化。
- 转入丙酮二甲苯(1:1)稍洗。
- 二甲苯透明 2-3 次。
- 中性树胶封固。 结果:存在于胞质和核仁内的核糖核酸呈红紫色,胞核染色质内的脱氧核糖核酸绿色或绿蓝色。