胶原纤维

胶原纤维是三种纤维中分布最广泛,含量最多的一种纤维。广泛分布于各脏器内。在皮肤、巩膜和肌腱最为丰富。胶原纤维染色主要用于和肌纤维的鉴别。
一、苦味酸?酸性品红法 (Van Gieson,1889)
    试剂配制:
    (一)Weigert 氏铁苏木素液
    A 液:苏木素                            1g
    无水酒精                                100m1
    B 液:30%三氯化铁液                    4ml
    蒸馏水                                  100ml
    纯盐酸                                  lml
    A、B 两液需分瓶盛放,A 液配制后数天即可用,不宜配制过多,如保存时间过长则染色不良。平时应密封保存,B 液配制后立即可用。临用前将 A、B 两液等量混合。
    (二)Van Gieson 氏染液
    A 液:  1%酸性品红水溶液
    B 液:苦味酸饱和水溶液(约 1.2%)
A、B 两液分瓶盛放。临用前取 A 液 1 份,B 液 9 份混合后使用。

操作方法:
  1. 组织固定于 10%甲醛液,常规脱水包埋。
  2. 切片脱蜡至水。
  3. 用 Weigert 氏铁苏木素液染 5 ~ 10 分钟。
  4. 流水稍洗。 
  5.1%盐酸酒精迅速分化。 
  6. 流水冲洗数分钟。   
  7. 用 Van Gieson 氏液染 1 ~ 2 分钟。
  8. 倾去染液,直接用 95%酒精分化和脱水(可放入温箱烤干后,直接透明封片)。
  9. 无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。
        结果:    
    胶原纤维呈鲜红色,肌纤维,胞质及红细胞黄色,胞核蓝褐色。

(二)、Masson 三色染色法
   丽春红酸性品红液: 丽春红 0.7 g ,酸性品红 0.3 g,
   蒸馏水 99ml,冰醋酸 1 ml
   苯胺蓝液: 苯胺蓝 2 g ,蒸馏水 98 ml,醋酸 2 ml 
   亮绿液: 亮绿 0.2g ,蒸馏水 100 ml,冰醋酸 0.2 ml
染色步骤:

  1. 切片脱蜡至蒸馏水
  2. 苏木素染 5 ~ 10 分钟
  3. 盐酸酒精分化
  4. 流水蓝化,蒸馏水洗(苏木素可不染)
  5. 丽春红酸性品红液中染 5 ~ 8 分钟
  6. 蒸馏水洗
  7. 1% 磷钼酸中染 1 ~ 3 分钟
  8. 不用水洗直接入苯胺蓝液或亮绿液 5 分钟 (如染色效果不佳,可在冰醋酸内脱色后重染)
  9. 水速洗,置 60℃ 温箱中烘干,二甲苯透明,封固
        结果:胶原纤维蓝色(苯胺蓝复染)或绿色(亮绿复染),肌纤维、纤维素红色。

注意事项:

  1. 组织用 Bouin 氏液固定为佳。。
  2. 用 l%磷钼酸处理时可在镜下控制,见肌纤维呈红色,胶原纤维呈淡红色即可。