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神经组织

尼氏体 一、缓冲亚甲蓝法（ Pischingert 法） 试剂配制：

  1. 0.2N 醋酸盐缓冲液，pH4.6 甲液：冰醋酸 1.2ml，蒸馏水加至 100ml 乙液：醋酸钠含 3H2O 2.72g，蒸馏水加至 100ml 两液等份混合后调 pH 至 4.6。
  2. 缓冲亚甲蓝染液：0.2N 醋酸盐缓冲液，pH4.62ml，亚甲蓝 0.064g，蒸馏水 98ml
  3. 4%钼酸铵液：钼酸铵 4g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
  4. 切片脱蜡至水。
  5. 入缓冲亚甲蓝染液内染 10 分钟。
  6. 0.2N 醋酸盐缓冲液（pH4.6）分化 1-3 分钟，在显微镜下观察。
  7. 4%钼酸铵液处理切片 3-5 分钟。
  8. 蒸馏水洗。
  9. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：尼氏体染成鲜蓝色。

二、混合染色法 试剂配制：

  1. 混合染色液：焦油紫 10mg，硫堇 10mg，亚甲蓝 10ml，甲苯胺蓝 10mg，蒸馏水 100ml
  2. 0.5%曙红酒精液：曙红 Y0.5g，95%酒精加至 100ml 操作方法：
  3. 切片脱蜡至水。
  4. 混合染色液染 24 小时。
  5. 蒸馏水稍洗。
  6. 用 95%酒精分化，显微镜下控制。
  7. 入 0.5%曙红酒精液复染数秒钟。
  8. 无水酒精脱水，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：尼氏体及核仁呈紫蓝色，其他组织红色。 注意事项：
  9. 用于尼氏体染色的组织要新鲜，固定迅速。否则，尼氏体可溶解而不易着染。
  10. 尼氏体的染色标本需避光保存，容易褪色。

神经轴突 一、银浸镀法（Marsland，Glees 和 Erikson，1954） 试剂配制：

  1. 0.5%火棉胶液：火棉胶片 0.5g，无水酒精乙醚液（1:1）加至 100ml，待火棉胶慢慢溶解混合均匀即可。
  2. 20%硝酸银溶液：硝酸银 20g，蒸馏水加至 100ml
  3. Marsland 氏银氨溶液：将 20%硝酸银水溶液 30ml 以及无水酒精 20ml 混合，然后逐滴加入氢氧化铵，边滴边摇动，直至最初形成的沉淀刚好溶解，再加入氢氧化铵 5 滴，即可。
  4. 5%硫代硫酸钠水溶液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
  5. 切片脱蜡至无水酒精。再入无水酒精乙醚（1：1）混合液稍洗。
  6. 入 0.5%火棉胶液浸半分钟。
  7. 取出切片，抹去切片底面多余火棉胶液，稍干后将切片放入 80%酒精 10 分钟。
  8. 蒸馏水浸洗。
  9. 放入预先加热至 37℃ 的 20%硝酸银液内 30 分钟。
  10. 蒸馏水速洗。
  11. 入 10%中性甲醛液还原，共 2 次，每次 10 秒钟。
  12. 不用水洗，直接入 Marsland 氏银氨液作用 30 秒钟。
  13. 取出切片，抹去多余的银氨液，直接入 10%中性甲醛液还原约 1 分钟。
  14. 蒸馏水冲洗，镜下观察。
  15. 5%硫代硫酸钠液处理 1 分钟。
  16. 流水冲洗。
  17. 经各级酒精脱水，再用无水酒精乙醚（1:1）除去火棉胶膜。
  18. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：神经轴突，树突呈棕黑色，背景淡棕色。

二、甘氨酸银浸镀法（ Palmgren，1948） 试剂配制：

  1. 酸性甲醛液：甲醛液 25ml， 蒸馏水 75ml，1%硝酸水溶液 0.2ml
  2. 5%甘氨酸水溶液：甘氨酸 5g，蒸馏水加至 100ml
  3. 甘氨酸银溶液：硝酸银 15g，硝酸钾 10g，蒸馏水 100ml，5%甘氨酸水溶液 1ml
  4. 还原液：焦性没食子酸（pyrogallol）1g，蒸馏水 45ml，无水酒精 55ml，1%硝酸水溶液 0.2ml 配制完 24 小时后使用。
  5. 氯化金水溶液：氯化金 1g，蒸馏水 200ml，冰醋酸 0.2ml
  6. 苯胺油酒精液：50%酒精 100ml，苯胺油 2 滴
  7. 5%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
  8. 切片脱蜡至水。
  9. 入酸性甲醛液于室温处理 5-10 分钟。
  10. 蒸馏水洗 3 次，每次约 2 分钟。
  11. 把切片置入甘氨酸银液于室温（20-25℃）作用 15-30 分钟，如果在 37℃ 温箱内作用约需 4-5 分钟。
  12. 取出切片用滤纸吸干多余银液。
  13. 入预热 45℃ 的还原液作用 1 分钟。将还原液在水浴中加热至 45℃，立即插入切片，并轻轻摇动，当还原液有云雾状混浊时，更换新的还源液，约 1 分钟至无雾状出现，再持续半分钟。
  14. 用 50%酒精洗切片 5-10 秒钟后，再用蒸馏水洗，镜下观察。如颜色仍淡可由第 3 步开始再重复一次，并减少在甘氨酸银液的浸镀时间，也可在还原液作用时的温度降底至 37℃。
  15. 入氯化金水溶液数分钟，直到黄棕色脱去。
  16. 滴入苯胺油酒精液加强染色，约 15 秒钟。
  17. 流水冲洗切片。
  18. 5%硫代硫酸钠液处理 1 分钟。
  19. 流水冲洗。
  20. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：神经纤维呈棕至黑色。

神经髓鞘   一、碳酸锂苏木素法（Loyez，1910） 试剂配制：

  1. La Manna 氏铬化液：重铬酸钾 9.5g，氯化锌 4.5g，蒸馏水 100ml
  2. 4%硫酸铁铵水溶液：硫酸铁铵 4g，蒸馏水加至 100ml
  3. 10%苏木素无水酒精液：苏木素 10g，无水酒精加至 100ml 用小口砂塞瓶盛装，混合溶解后放置 2-3 周成熟。
  4. 碳酸锂苏木素染液：10%苏木素无水酒精液（成熟）10ml，碳酸锂饱和水溶液 2ml，蒸馏水 88ml
  5. Loyez 氏分化液：四硼酸钠 1g，铁氰化钾 1.25g，蒸馏水 100ml 操作方法：
  6. 组织固定于 20%甲醛液或甲醛钙液，以不少于三天为宜。
  7. 入 La Manna 氏铬化液于 37℃ 处理 1-2 天。
  8. 流水冲洗一晚。
  9. 常规脱水包埋，石蜡切片，厚约 4-6μm。
  10. 切片脱蜡至水。
  11. 4％硫酸铁铵水溶液媒染 12-24 小时。
  12. 蒸馏水洗二次。
  13. 碳酸锂苏木素染液染 12-24 小时。
  14. 自来水洗去多余染液。
  15. 4%硫酸铁铵水溶液初步分化，并经常取出，蒸馏水洗，显微镜下观察，至其他组织呈淡灰黄色而髓鞘显示清晰为止。
  16. 自来水洗 2 分钟。
  17. 入 Loyez 氏分化液完成分化，约 2 分钟。
  18. 自来水充分洗。
  19. 常规脱水透明，中性树胶封固。 结果：髓鞘及红细胞呈深蓝色，其他组织淡黄色至灰黄色。 注意事项：
  20. 10%苏木素无水酒精溶液要提前配制，因配制后须经二、三个星期以上才成熟可用，因此需作为贮备液存放。
  21. 在用 4%硫酸铁铵液分化时，要经常在镜下观察，不可分化过度，可改用 2%硫酸铁铵水溶液分化。

二、砂罗铬花青法（改良的 Page 法，1965，1970） 试剂配制：

  1. 10%硫酸铁铵水溶液：硫酸铁铵 10g，蒸馏水加至 100ml
  2. 砂罗铬花青染液：砂罗铬花青 R0.2g，蒸馏水 96ml，10%硫酸铁铵水溶液 4ml，浓硫酸 0.5ml，依次溶解，充分混合，用小口砂塞瓶盛装室温保存。
  3. 荧光桃红染液：荧光桃红 B（phloxine Ｂ）0.5g，0.5%氯化钙水溶液 100ml 操作方法：
  4. 组织固定于 20%甲醛液，以不少于 3 天为宜，按常规脱水包埋，切片厚 4-6μm。
  5. 切片脱蜡至水。
  6. 滴加砂罗铬花青染液于切片上，室温染 15-20 分钟。
  7. 倾去染液，流水冲洗 1-2 分钟。
  8. 10%硫酸铁铵水溶液分化 1-5 分钟，至胶原纤维和肌纤维接近无色或淡灰色，髓鞘呈清晰的蓝色为止，每次取出水洗后应在显微镜下观察控制。也可用 4%硫酸铁铵液分化，但作用很慢，需要时间较长。
  9. 流水冲洗 5-10 分钟。
  10. 荧光桃红染液复染数秒钟。
  11. 水洗后各级酒精脱水。
  12. 二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：髓鞘呈鲜蓝色，红细胞深蓝色，神经细胞胞质，肌纤维及胶原纤维鲜红色。胞核和核仁蓝色。

神经胶质细胞 氯化金升汞法（ Gajal，1913） 试剂配制：

  1. 溴甲醛液：溴化铵 2g，甲醛液 15ml，蒸馏水 85ml
  2. 氯化金升汞液：1%氯化金液 10ml，二氯化汞 0.5g，蒸馏水 60ml 将二氯化汞溶于蒸馏水（可适当加温促使溶解），待稍冷加入氯化金液充分混合后过滤，本液在临用前配制。
  3. 5%硫代硫酸钠液：硫代硫酸钠 5g，蒸馏水加至 100ml 操作方法：
  4. 新鲜组织，厚 3-5mm，固定于溴甲醛液 2-5 天。
  5. 流水冲洗 20 分钟，再用蒸馏水洗。
  6. 冰冻切片厚 20-30μm。
  7. 蒸馏水洗 3 次，每次约数秒钟。
  8. 用玻璃钩小心将切片捞入氯化金升汞液于室温暗处镀染 4-8 小时，当切片呈紫红色时，即取一片置于载玻片放在显微镜下观察，在低倍镜下见星形细胞出现即可。
  9. 蒸馏水稍洗。
  10. 5%硫代硫酸钠液处理 5 分钟。
  11. 用自来自水充分洗涤数次，再用蒸馏水洗，并将切片贴在载玻片上，凉干，二甲苯透明，中性树胶封固。 结果：星形胶质细胞及其突起呈紫红色至紫黑色，神经细胞浅紫红色，神经纤维一般不着色。

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