糖类
多糖类 高碘酸-无色品红-橙黄 G 法(Pearse,1953) 试剂配制:试剂配制:
- 0.5%高碘酸水溶液:高碘酸 0.5g,蒸馏水加至 100ml
- 无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水 200ml,1N 盐酸 20ml,偏重亚硫酸钠 1.5g,活性碳 1.5g Schiff 试剂配制:
- 碱性品红 1g,放入 200 毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
- 冷却至 50℃ 时过滤,滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
- 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
- 加活性炭 2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃ 冰箱保存。
- 0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠 0.5g,蒸馏水加至 100ml
- Mayer 氏苏木素液:苏木素 0.1g,蒸馏水 100ml,碘酸钠 20mg,硫酸铝铵 5g ,柠檬酸 0.1g,水合氯醛 5g 取一只 200 毫升洁净的烧杯盛蒸馏水,加入苏木素用玻棒搅拌使其完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠及硫酸铝铵,搅拌至溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,此时溶液呈紫红色,过滤于口砂塞瓶内,可保存多月。
- 橙黄 G 染液,橙黄 G2g,蒸馏水 100ml,磷钨酸 5g 先把磷钨酸溶于蒸馏水内,再加入橙黄 G,摇动数分钟使其尽量溶解,静置一夜。用时吸取上清液。 操作方法:
- 切片脱蜡至水。
- 0.5%高碘酸水溶液氧化 5-8 分钟。
- 流水冲洗 2 分钟,再用蒸馏水洗。
- 入无色品红注于暗处并加盖作用 10-20 分钟。
- 0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗 2 次,每次约 1 分钟。
- 流水冲洗 2 分钟。
- 天青石蓝液染 2-3 分钟。
- 水洗。
- Mayer 氏苏木素液杂 2-3 分钟。
- 水洗。
- 1%盐酸酒精分化。
- 流水冲洗 10 分钟。
- 橙黄 G 液复染 10-20 秒。
- 水洗。
- 常规脱水透明,中性树胶封固。 结果:胞核呈蓝褐至深褐色,红细胞和肌纤维橙黄色。红至紫红色均为阳性反应。对 PAS 呈阳性反应的物质主要有糖原消化道、呼吸道和睡液腺的粘液,甲状腺胶质,脂褐素,垂体嗜碱细胞,软骨基质,基底膜,霉菌,纤维蛋白。胶原纤维以及一些糖脂类等也呈阳性反应。
糖 原 一、 高碘酸-无色品红法( MaManus,1948) 试剂配制:试剂配制:
- 0.5%高碘酸水溶液:高碘酸 0.5g,蒸馏水加至 100ml
- 无色品红液:碱性品红(basic fuchsin)1g,蒸馏水 200ml,1N 盐酸 20ml,偏重亚硫酸钠 1.5g,活性碳 1.5g Schiff 试剂配制:
- 碱性品红 1g,放入 200 毫升蒸馏水中,煮沸,搅拌,充分溶解。
- 冷却至 50℃ 时过滤,滤液中加入当量盐酸 20 毫升。
- 加偏重亚硫酸钠 1.5 g,置于暗处过夜。
- 加活性 2 g,摇晃,过滤,以无色为最佳。棕色瓶,4℃ 冰箱保存。
- 0.5%偏重亚硫酸钠溶液:偏重亚硫酸钠 0.5g,蒸馏水加至 100ml
- Mayer 氏苏木素液:苏木素 0.1g,蒸馏水 100ml,碘酸钠 20mg,硫酸铝铵 5g ,柠檬酸 0.1g,水合氯醛 5g 取一只 200 毫升洁净的烧杯盛蒸馏水,加入苏木素用玻棒搅拌使其完全溶解(可稍加温),再加入碘酸钠及硫酸铝铵,搅拌至溶解,最后加入柠檬酸与水合氯醛,此时溶液呈紫红色,过滤于口砂塞瓶内,可保存多月。
- 1%甲基绿水溶液:甲基绿(methyl green)1g,蒸馏水加至 100ml 用三氯甲烷抽提:取 2%甲基绿水溶液 20ml,倾入洁净分液漏斗,加入三氯甲烷 20ml,充分摇荡混合,使其内的甲基紫溶于三氯甲烷中而呈紫红色。旋动分液漏斗下部的砂塞,慢慢地把有着色的三氯甲烷流去。如此反复更换三氯甲烷,直到三氯甲烷无紫红色为止,即可得到得纯的甲基绿溶液。
- 1%淀粉酶:淀粉酶(diastase)1g,蒸馏水加至 100ml
- 唾液:用烧坏收集唾液,加蒸馏水 5-10 倍,用玻棒搅拌数分钟,必要时可用双层纱布过滤。 操作方法:
- 取新鲜薄片组织,立即用 Gendre 氏固定液固定 6-12 小时或 Garnoy 氏液固定 3-6 小时,然后转入 95%酒精,其间可更换两次新液。
- 第二天上午转入无水酒精按常规脱水透明,石蜡包埋,切片厚 4-5μm。
- 取两张连续切片,分别作 1 和 2 记号,然后把 2 片脱蜡至水。
- 把 2 号切片置入预热至 37℃ 的 1%淀粉酶液,于 37℃ 温箱内消化 1 小时,或用预热至 37℃ 的唾液于 37℃ 温箱消化 30 分钟。
- 取出切片水洗。
- 在消化过程中,把 1 片脱蜡至水。
- 在 1、2 两片同时滴入 0.5%高碘酸水溶液氧化 5-8 分钟。
- 流水冲洗 2 分钟,再用蒸馏水洗一次。
- 入无色品红液于暗处并加盖作用 10-20 分钟。
- 用 0.5%偏重亚硫酸钠液滴洗 2 次,每次约 1 分钟。
- 流水冲洗 2 分钟。
- 1%甲基绿水溶液复染胞核 3-5 分钟。或用 Mayer 氏苏木素浅染胞核。
- 水洗。
- 常规脱水透明,中性树胶封固。 结果:胞质内阳性的亮红色颗粒为糖原,经消化后为阴性对照片。
二、胭脂红法( Best,1906) 试剂配制:
- Best 胭脂红贮备液:胭脂红(carmine)2g,碳酸钾 1g,氯化钾 5g 蒸馏水 60ml 取三角烧瓶一个,加入上述试剂,用玻棒搅动混合,于水浴中慢慢煮沸至颜色变为深红(约 3-5 分钟)。冷却后过滤,加入氢氧化铵 20 毫升,于小口砂塞瓶密封保存于冰箱。
- Best 胭脂红染液:Best 烟脂红贮备液 10ml,氢氧化铵 15ml,甲醇 15ml
- Best 氏分化液:无水酒精 20ml,甲醇 10ml,蒸馏水 25ml 操作方法:
- 新鲜薄片组织立即固定于 Gendre 氏或 Carnoy 氏液。脱水、包埋同前法。
- 切片脱蜡到水。
- Harris 氏苏木素染 5-10 分钟。
- 水洗。
- 1%盐酸酒精分化。
- 流水冲洗 5 分钟。
- 用 Best 胭脂红染液染 20-30 分钟。
- 不用水洗,直接用 Best 氏分化液浸洗二次,每次 1 至数秒钟。
- 95%酒精,无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 结果:糖原呈鲜红色,胞核蓝色。